Viabilidade seminal e status da capacitação espermática de sêmen ovino refrigerado em diferentes diluentes, diluições e condições de aerobiose

Abstract

O objetivo deste estudo foi de determinar o status de capacitação espermática (CA) e de reação acrossomal (RA) durante o processamento e refrigeração do sêmen ovino sob diferentes diluentes, fatores de diluição e condições de aerobiose em função do tempo. Foram coletados ejaculados de dois carneiros adultos por vagina artificial a intervalos de 48-72 h. Após avaliações macro- e microscópicas, o sêmen foi segregado em grupos sob três diluentes (Tris-gema, citrato-gema ou leite desnatado), dois fatores de diluição (1 x 109 ou 100 x 106 células/mL) e duas condições de aerobiose (aeróbico ou semi-anaeróbico). O sêmen foi mantido refrigerado por 72 h, com avaliações a cada 24 h desde o equilíbrio a 5oC (T0). Alíquotas dos ejaculados frescos e de cada sub-grupo refrigerado de acordo com o diluente, a diluição e a aerobiose, foram coletadas nos tempos T0 e T72 para a determinação do status do acrossomo por coloração com clortetraciclina (CTC), e da integridade de membrana com azul de tripano e Giemsa. As maiores e menores quedas de motilidade e vigor espermáticos (M/V) em função do tempo foram observadas com a utilização de citrato-gema e Tris-gema, respectivamente. A proporção de espermatozoides com capacitação e/ou reação acrossomal aumentou após a diluição e armazenamento do sêmen ovino a 5oC, havendo correlação negativa com a viabilidade e M/V em função do tempo. Os fatores de variação sobre a M/V foram o diluente e o tempo de refrigeração, enquanto o status do acrossomo e a sobrevivência espermática esteve mais associada à condição de aerobiose e fator de diluição, com o diluente apresentando menor impacto no status do acrossomo em função do tempo.

The aim of this study was to determine the status of sperm capacitation (CA) and acrosome reaction (AR) during processing and refrigeration of ovine semen under different extenders, dilution factors and aerobiosis conditions as a function of time. Ejaculates were collected from two adult rams by artificial vagina at 48-72 h intervals. After macro- and microscopic evaluations, semen was segregated into groups under three extenders (Tris-egg yolk, citrate-egg yolk or skimmed milk), two dilution factors (1 x 109 or 100 x 106 cells/mL) and two aerobiosis conditions (aerobic or semi-anaerobic). Diluted semen was kept refrigerated for 72 h, with evaluations every 24 h from the equilibrium at 5 oC (T0). Aliquots of fresh ejaculates and of each refrigerated diluted subgroup according to extender, dilution and aerobiosis were collected at times T0 and T72 for determination of acrosome status by staining with chlortetracycline (CTC), and membrane integrity with trypan blue and Giemsa. The largest and smallest falls in sperm motility and sperm vigor (M/V) as a function of time were observed with the use of citrate-yolk and Tris-yolk extenders, respectively. The proportion of capacitated and/or acrosome reacted sperm cells gradually increased over time after dilution and storage at 5oC, with a negative correlation observed with viability and M/V as a function of time. Variation factors on M/V were extender and refrigeration time, while acrosome status and sperm survival were more associated with aerobiosis condition and dilution factor, with the extender having less impact on the acrosome status as a function of time.