Células-tronco endometriais : isolamento, caracterização e efeitos na viabilidade e capacidade de migração após tratamento com citrato de clomifeno

Abstract

Introdução: Muitos casais inférteis buscam ajuda na reprodução assistida para realizar o desejo de uma gestação. Diversas técnicas podem ser utilizadas, devendo ser escolhida de acordo com a causa da infertilidade e das características e condições clínicas da mulher. A estimulação ovariana controlada consiste na administração de hormônios e/ou fármacos capazes de induzir a maturação de diversos folículos. Muito utilizado, o citrato de clomifeno é um agonista parcial, que se liga aos receptores estrogênicos no hipotálamo, resultando em maturação dos folículos e ovulação. Objetivo: O objetivo deste trabalho é padronizar a técnica de isolamento e caracterização de células-tronco endometriais. Além disso, observar os efeitos do tratamento com citrato de clomifeno na capacidade de migração e viabilidade das células em cultura. Metodologia: As células foram isoladas e mantidas em cultura até atingirem confluência de 80-90%. Foram realizados ensaios de caracterização das células-tronco, como diferenciação em outros tipos celulares, ensaio de clonogenicidade e citometria de fluxo. Após o tratamento com 6 diferentes concentrações de citrato de clomifeno por 24 horas, foi avaliada a capacidade de migração e a viabilidade das células. Resultados: Foi possível padronizar a extração e cultivo das eMSC, além de confirmar a capacidade de diferenciação das células em adipócitos, condrócitos e osteócitos. As células em cultura mantiveram sua capacidade de formar colônia e apresentaram os marcadores de superfície específicos de células-tronco mesenquimais (CD73, CD90 e CD105) e negativos para os marcadores de células dendríticas (CD11b) e de células-tronco hematopoiéticas (CD45). Após o tratamento com 5nM, 25nM, 50nM, 250nM, 500nM e 1000nM de citrato de clomifeno as células mantiveram sua capacidade de proliferação e migração e quando receberam o tratamento com 5nM, 25nM, 50nM, 250nM, 500nM apresentaram maior viabilidade quando comparadas com o grupo controle e o grupo que recebeu o tratamento com 1000nM de citrato. Conclusão: É possível extrair e manter em cultivo células-tronco mesenquimais do tecido endometrial. Apesar dos resultados favoráveis em relação a vibilidade e capacidade de migração são necessários mais estudos para verificar o efeito do citrato em cultura celular.

Introduction: Many infertile couples seek help in assisted reproduction to fulfill their desire for a pregnancy. Several techniques can be used, and should be chosen according to the cause of infertility and the characteristics and clinical conditions of the woman. Controlled ovarian stimulation consists of the administration of hormones and/or drugs capable of inducing the maturation of several follicles. Widely used, clomiphene citrate is a partial agonist, which binds to estrogen receptors in the hypothalamus, resulting in follicle maturation and ovulation. Objective: The objective of this work is to standardize the technique of isolation and characterization of endometrial stem cells. In addition, to observe the effects of clomiphene citrate treatment on the migration capacity and viability of cells in culture. Methodology: Cells were isolated and maintained in culture until reaching 80-90% confluence. Stem cell characterization assays were performed, such as differentiation into other cell types, clonogenicity assay and flow cytometry. After treatment with 6 different concentrations of clomiphene citrate for 24 hours, the migration capacity and cell viability were evaluated. Results: It was possible to standardize the extraction and cultivation of eMSCs, in addition to confirming the ability of cells to differentiate into adipocytes, chondrocytes and osteocytes. Cells in culture maintained their ability to form colonies and showed surface markers specific for mesenchymal stem cells (CD73, CD90 and CD105) and negative for markers for dendritic cells (CD11b) and hematopoietic stem cells (CD45). After treatment with 5nM, 25nM, 50nM, 250nM, 500nM and 1000nM of clomiphene citrate the cells maintained their ability to proliferate and migrate and when they received treatment with 5nM, 25nM, 50nM, 250nM, 500nM they showed greater viability when compared to the control group and the group that received the treatment with 1000nM of citrate. Conclusion: It is possible to extract and maintain in culture mesenchymal stem cells from endometrial tissue. Despite the favorable results regarding viability and migration capacity, further studies are needed to verify the effect of citrate in cell culture.