Cistogênese : desenvolvimento de modelo de estudo in vitro

Abstract

Os cistos inflamatórios são comuns na clínica odontológica. Sua patogenia está associada a infecção dos canais radiculares gerando resposta inflamatória frente ao desafio de inibir a proliferação microbiológica. O tratamento preconizado é a desinfecção do sistema de canais radiculares através da terapia endodôntica. Contudo, a lesão pode persistir mesmo após estabelecido o tratamento. Os mecanismos envolvidos na origem e manutenção do cisto inflamatório não estão completamente esclarecidos. Em busca de novas evidências, o objetivo do presente estudo é aprimorar um modelo in vitro de cistogênese, desenvolvido previamente pelo nosso grupo de pesquisa.. Um total de 1x105 células HaCaT foram utilizadas para formar esferoides em placas tratadas com agarose de baixa fusão. Após 24 horas, os esferoides foram coletados, embebidos em colágeno não polimerizado (grupo HaCat), ou associados a 1x105 fibroblastos (grupo HaCat + hFIB), ou ainda associados a 1x105 fibroblastos e 1x105 leucócitos coletados do sangue humano periférico (grupo HaCat + hFIB + LEUK) e transferidos individualmente para placas de 24 poços. Os grupos experimentais de esferoides foram mantidos assim por um período de até 7 dias. Diferentes concentrações de fibroblastos (4x104, 1x105, 2x105) foram utilizadas para identificar qualitativamente a melhor concentração a ser adotada. Foram capturadas imagens dos 3 grupos nos dias 1, 3, 5 e 7. O software ImageJ foi utilizado para análise da integridade e área de cada esferoide. Para comparação dos dados, o software GraphPad Prism 5 (GraphPad Software, Inc., CA, USA) foi utilizado e o teste One Way Anova aplicado (p<0.05). Os grupos HaCat + hFIB e HaCat + hFIB + LEUK, além de não apresentarem dispersão significativa das células, mostraram manutenção estrutural dos esferoides em todos os dias observados, enquanto o grupo HaCat mostrou dispersão após 7 dias (p<0.05). Portanto, o modelo de cistogênese proposto no presente estudo a partir do grupo HaCat + hFIB + LEUK aproxima as características observadas in vitro e in vivo. Novas pesquisas abordando a origem dos cistos inflamatórios utilizando nosso modelo podem ser realizadas visando ampliar o conhecimento do tema

Inflammatory cysts are common in dental practice. Pathogeny is established as consequence of infection in root canal system when an inflammatory response takes place due to the challenge of inhibit bacterial aggression. Treatment aims disinfection of root channels and endodontic obturation. However, some inflammatory cysts persist even after treatment establishment. Mechanisms evolved in cystic origin and maintenance are not completely understood. Searching new evidence, the present study aims improve a cystogenesis model previously published by our research group. A total of 1x105 cells were used to form spheroid structures on agarose treated plates. After 24 hours, spheroids were collected and embedded in 600 μL polymerized collagen (HaCat group) or associated to 1x105 hFIB cells (HaCat + hFIB group) or 1x105 hFIB cells and 1x105 human peripheral blood leukocytes (HaCat + hFIB + LEUK group). Then, they were transferred to a 24 wells plate for a period up to 7 days. Different number of fibroblasts (4x104, 1x105, 2x105) was used to determine the ideal concentration to associate to collagen matrix. Images of spheroids from 3 groups were captured in day 1, 3, 5 and 7. ImageJ software was used to analyze the integrity and area of each spheroid. To data comparison, GraphPad Prism 5 software (GraphPad Software, Inc., CA, USA) was used and the One Way Anova test applied (p<0.05). HaCat + hFIB and HaCat + hFIB + LEUK groups showed no cell dispersion and maintenance of spheroids integrity, while HaCaT group demonstrate cell dispersion after 7 days (p<0.05). Therefore, cystogenesis model proposed in this study using HaCat + hFIB + LEUK group approximate in vitro to in vivo conditions. Exploring our model, new researches about origin of inflammatory cysts should be conducted aiming the improvement of actual knowledge.