Expressão gênica e atividade de tirosina quinase do receptor de insulina em miométrio e mioma humanos

Abstract

A insulina tem efeitos no metabolismo, no crescimento e na síntese de RNA/DNA das células. Seu envolvimento com a proliferação de células tumorais já foi demonstrado. Os mecanismos moleculares desta ação ainda não são bem conhecidos. O papel deste hormônio e da cadeia de transmissão do sinal de seu receptor ainda não foram estudados em miométrio e mioma humanos. O objetivo deste estudo foi estabelecer técnicas e verificar a expressão gênica e a atividade de tirosina quinase do receptor de insulina em miométrio e mioma humanos. Material e métodos: miométrio e mioma foram obtidos de histerectomias indicadas independentemente deste estudo. RNA foi extraído pelo método fenol/clorofórmio. Reação em cadeia da polimerase transcriptase reversa (RT-PCR) foi realizada utilizando-se primers específicos para a seqüência do receptor de insulina. Membranas foram isoladas e experimentos de autofosforilação foram realizados. Resultados: a expressão de RNA para receptor de insulina foi semelhante entre miométrio (0,634 ± 0,038) e mioma (0,649 ± 0,047, p = 0,813). A autofosforilação do receptor foi semelhante entre miométrio (1,496 ± 0,310) e mioma (1,593 ± 0,129, p = 0,650). Conclusão: a expressão gênica e a atividade de tirosina quinase do receptor de insulina não foram diferentes entre miométrio e mioma.

lnsulin has effects on metabolism, growth and RNA/DNA synthesis. lt has been demonstrated that it is involved with tumoral cell proliferation. The molecular mechanisms of this action are still not clear, and how insulin participates in the tumorigenic process remains to be fully explained. This hormone and its signal transduction cascade have not been studied in myometrium and leiomyomas. The aims of this study were to establish methods and to evaluate insulin receptor (IR) mRNA expression and IR tyrosine kinase activity in human normal myometrium and myoma. Material and Methods: miometrium and myoma were obtained from hysterectomies indicated independently from this study. RNA was extracted with phenol/chloroform method. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RTPCR) of myometrium and myoma mRNA was performed with primers specific for insulin receptor gene sequences. Plasma membranes were prepared and autophosphorilation experiments were performed. Results: arbitrary units (densitometry) of mRNA for miometrium was 0.634 ± 0.038 and for myoma 0.649 ± 0.047 (p=0.813); and for autophosphoylation miometrium was 1.496 ± 0.310 and myoma 1.593 ± 0.129 (p = 0.650). Conclusion: methods to study IR receptor expression and IR autophosphorylation in normal miometrium and leiomyoma. There was no difference in IR receptor expression and IR autophosphorylation between normal miometrium and leiomyoma.