Desenvolvimento de um método por cromatografia líquida de alta eficiência acoplada à espectrometria de massas em tandem (HPLC-MS/MS) para diagnóstico de intoxicações agudas por ácido valpróico

Abstract

O ácido valpróico (VPA) é amplamente usado para tratar epilepsia, convulsões, distúrbios bipolares e enxaquecas, agindo como depressor do sistema nervoso central. O VPA é o medicamento antiepiléptico mais comumente utilizado, porém, sua estreita faixa terapêutica pode levar a sintomas graves de intoxicação. Seu uso generalizado também aumenta o risco de uso deliberado para suicídio, com sintomas de intoxicação incluindo letargia, sedação, vômitos e taquicardia. A toxicidade da sobredosagem pode levar a complicações graves, como defeitos cardíacos, parkinsonismo e trombocitopenia. O objetivo deste trabalho foi estudar os métodos de extração de VPA em amostras biológicas de plasma e desenvolver um método quantitativo para análise de amostras recebidas pelo Centro de Informação Toxicológica do Rio Grande do Sul (CIT/RS), provenientes do atendimento de casos de toxicologia de emergência. Foi aplicado um método de extração utilizando a técnica de extração em fase sólida híbrida com precipitação de proteínas (HybridSPE-PPT), seguido por análise por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas em tandem (LC-MS/MS), o qual se mostrou eficaz na detecção de VPA em amostras de plasma, com um tempo de execução cromatográfica de 4 minutos. O método foi validado de acordo com as diretrizes da Norma ANSI/ASB 036, demonstrando um limite de quantificação inferior a 20 μg/mL e uma precisão satisfatória (CV<9%). Para confirmar a aplicabilidade do método, foram analisadas 13 amostras de plasma de casos in vivo com suspeita de intoxicação por VPA, atendidos pelo CIT/RS.

Valproic acid (VPA) is widely used to treat epilepsy, seizures, bipolar disorders and migraines, acting as a central nervous system depressant. VPA is the most commonly used antiepileptic drug, however, its narrow therapeutic range can lead to severe symptoms of intoxication. Its widespread use also increases the risk of deliberate use for suicide, with symptoms of intoxication including lethargy, sedation, vomiting and tachycardia. The toxicity of overdose can lead to serious complications such as heart defects, parkinsonism and thrombocytopenia. The objective of this work was to study VPA extraction methods in biological plasma samples and develop a quantitative method for analyzing samples received by Toxicological Information Center of Rio Grande do Sul (CIT/RS), from emergency toxicology cases. An extraction method was applied using the hybrid solid phase extraction technique with protein precipitation (HybridSPE-PPT), followed by liquid chromatography coupled to tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) analysis, which proved to be effective in detecting VPA in plasma samples, with a total chromatographic run time of 4 minutes. The method was validated according to the ANSI/ASB 036 guideline, demonstrating a lower limit of quantification below 20 μg/mL and satisfactory precision (CV<9%). To confirm the applicability of the method, 13 plasma samples were analyzed from in vivo cases suspected of VPA poisoning, attended by CIT/RS.