Mecanismos dos eventos pró-trombóticos em um modelo experimental de hipertensão na menopausa

Abstract

Mulheres na pós-menopausa têm um risco aumentado de desenvolver doenças cardiovasculares, como eventos pró-trombóticos associados à hipertensão. Embora o estrogênio pareça ter efeitos protetores em mulheres no período pré-menopausa, os mecanismos moleculares envolvidos nos eventos trombóticos após a queda dos níveis de estrogênio ainda não foram explicados. O objetivo deste trabalho foi investigar como plaquetas e a aorta contribuem para criar e manter um estado pró-trombótico em um modelo animal de hipertensão pós menopausa em ratas ovariectomizadas. Para tal, ratas espontaneamente hipertensas (SHR) e ratas Wistar Kyoto (WKY) normotensas, ambas com idade de 14 semanas, foram submetidas à ovariectomia bilateral e mantidas com dieta livre de fitoestrógenos. Então, diferentes parâmetros relacionados à função vascular, reatividade plaquetária e coagulação sanguínea foram analisados. A depleção dos níveis de estrogênio levou à hiper-reatividade plaquetária tanto em animais SHR quanto WKY. Acredita-se que o mecanismo envolvido esteja relacionado com a diminuição da expressão de COX2 na aorta e redução na velocidade de hidrólise de nucleotídeos como AMP, ADP e ATP presentes no soro e na superfície das plaquetas. O plasma das ratas ovariectomizadas apresentou um potencial pró-coagulante, o que foi confirmado através do aumento na geração de calicreína e FXa detectados na superficie de anéis de aorta. Ainda, observou-se que anéis de aorta obtidos dos animais SHR ovariectomizados tinham um potencial maior de gerar trombina do que anéis equivalentes de animais WKY. Nesse caso, o mecanismo envolvido pode estar relacionado ao aumento da expressão de fator tecidual e outros marcadores da via extrínseca da cascata de coagulação (FII, FX e PAR-1) e de fibrinólise (uPA e PAI-1) na aorta e plaquetas. Além disso, células de músculo liso de aorta pré- 7 tratadas em cultura com um pool de plasma obtido dos animais ovariectomizados desenvolveram um perfil pró-coagulante e um aumento da expressão de fator tecidual tempo-dependente. Esse perfil pró-coagulante induzido nas células de músculo liso é dependente de uma sinalização inflamatória, ja que o PDTC, um inibidor de NF-kB, atenuou a atividade pró-coagulante na superfície das células e reduziu a expressão do fator tecidual. Portanto, a diminuição dos níveis de estrogênio induz um fenótipo pró-trombótico tanto em animais normo quanto hipertensos, o que parece estar associado com uma hiperreatividade plaquetária e aumento da expressão do fator tecidual na aorta e nas plaquetas. O mecanismo envolve uma via de sinalização pró-inflamatória que oferece suporte a uma maior geração de trombina na aorta e nas células vasculares.

The risk of cardiovascular diseases such as the association of hypertension and prothrombotic events increase in postmenopausal women. Although estrogen seems to have some protective effects in premenopausal period, the molecular mechanisms underlying thrombotic events after estrogen depletion still remains obscure. The aim of the present study was to investigate how platelets and aorta contributes to create and maintain a prothrombotic state in an experimental model of postmenopausal hypertension in ovariectomized rats. For this purpose, a bilateral ovariectomy was performed in 14-week-old female spontaneously hypertensive (SHR) and normotensive Wistar Kyoto (WKY) rats maintained with a phytoestrogen free diet. Then, vascular parameters as well as molecular mechanisms of platelet, coagulation and aortic prothrombotic functions were accessed. Estrogen depletion induced an exacerbated platelet aggregation response in both SHR and WKY animals. The mechanism involved seems to be related to a decrease in aortic COX2 expression and reduction in AMP, ADP and ATP hydrolysis by 5’-nucleotidases in serum and platelet surface. A procoagulant potential was observed in plasma from ovariectomized rats and this was confirmed by the increase of kallikrein and FXa generation in aortic rings. Interestingly, aortic rings derived from ovariectomized SHR presented a greater thrombin generation capacity compared to equivalent rings from WKY rats. In this case, the mechanism involved seems to be related to the increase in tissue factor expression and other markers of extrinsic coagulation (FII, FX and PAR-1) and fibrinolysis (uPA and PAI-1) activation pathways in aorta and platelets. Similarly, aortic smooth muscle cells pre-treated with a plasma pool derived from estrogen depleted animals developed a procoagulant profile with a time-dependent increase in tissue factor expression. This procoagulant profile induced in aortic 9 smooth muscle cells was dependent of an inflammatory signalling, since PDTC, a NFκB inhibitor, attenuated the procoagulant activity and tissue factor expression. In summary, estrogen deficiency induces a prothrombotic phenotype in both normo and hypertensive rats which was associated with platelet proaggregatory ability and an increase in tissue factor expression in aorta and platelets. The mechanism involves a proinflammatory signalling that support greater thrombin generation on aorta and vascular smooth muscle cells.