Migração celular, viabilidade e reação tecidual de soluções irrigadoras à base de hipoclorito de cálcio : estudo in vitro e in vivo

Abstract

Introdução: O objetivo do presente estudo foi analisar a citotoxicidade e biocompatibilidade de soluções de hipoclorito de cálcio (Ca(OCl)2) comparadas a soluções de hipoclorito de sódio (NaOCl) in vitro em cultura de fibroblastos 3T3 e in vivo em ratos. Metodologia: Culturas de fibroblastos 3T3 foram expostas a diferentes concentrações de hipoclorito de cálcio e sódio e foi realizado um ensaio de "scratch". Além disso, a taxa de viabilidade foi analisada utilizando o teste Azul de Trypan. As soluções a 1 e 2,5% foram, também, injetadas no tecido conjuntivo de 18 ratos Wistar de 18 semanas de idade. A reação inflamatória tecidual foi avaliada em 2h, 24h e 14 dias após as injeções e as amostras foram qualitativamente analisadas em microscópio óptico. Análise estatística foi realizada utilizando teste ANOVA e post hoc de Tukey para testes in vitro e Kruskal‐Wallis e post hoc de Dunn para o teste in vivo (α=.05). Resultados: No ensaio de "scratch", Ca(OCl)2 não apresentou diferença estatística em relação ao controle no período de 24h (p<0.05). NaOCl e Ca(OCl)2 a 0.0075% e 0.005% apresentaram resultados de viabilidade similar ao grupo controle positivo (p > 0.05) no ensaio Azul de Trypan. No teste in vivo, Ca(OCl)2 1% mostrou uma diminuição significativa de neutrófilos entre 2h e 24h (p=0.041) e entre 2h e 14d (p=0.017). Não houve diferença estatística entre os grupos para linfócitos/plasmócitos e macrófagos. Conclusão: Ca(OCl)2 mostrou resultados favoráveis de viabilidade e induziu um baixo nível de resposta inflamatória tecidual, apresentando, assim, citotoxicidade e biocompatibilidade aceitáveis para uma solução irrigadora.

Introduction: The aim of the present study was to analyze cytotoxicity in vitro on cultured 3T3 fibroblasts and inflammatory tissue reaction in vivo on rats to calcium hypochlorite (Ca(OCl)2) solutions compared with sodium hypochlorite (NaOCl) solutions. Methods: Cultured 3T3 fibroblasts were exposed to different concentrations of calcium and sodium hypochlorite and a scratch assay was performed. The viability rate was analyzed with Trypan Blue assay. A. The 1 and 2.5% solutions were still injected into the subcutaneous tissues of eighteen male Wistar rats aged 18 weeks. Inflammatory tissue reaction was evaluated at 2h, 24h and 14 days after the injections and the samples were qualitatively analyzed through a light microscope. Statistical analysis was assessed by ANOVA and Tukey post hoc test for in vitro assays and by Kruskal-­‐Wallis and Dunn post hoc test for in vivo assay (α=.05). Results: In scratch assay, Ca(OCl)2 showed no statistically significant difference to control group at 24h (p<0.05). 0.0075% and 0.005% NaOCl and Ca(OCl)2 presented results similar to positive control group (p > 0.05) on Trypan Blue assay. In in vivo assay, 1% calcium hypochlorite group showed a significant decrease of neutrophils at 2h and 24h (p=0.041) and 2h and 14d (p=0.017). There was no statistically significant difference for lymphocytes/plasmocytes and macrophages among groups. Conclusions: Ca(OCl)2 showed favorable results of viability and induced an low level of inflammatory response, thus presenting an acceptable cytotoxicity and biocompatibility for an irrigant solution.