Desenvolvimento de metodologia analítica para determinação de fármacos mediante cromatografia líquida de alta eficiência utilizando planejamento multivariado

Abstract

Atualmente, o consumo e comercialização de fármacos no mundo são cada vez mais difundidos. Como grande parte dos fármacos consumidos é metabolizada para aumentar a hidrofilia, esses acabam sendo descartados nos esgotos domésticos, favorecendo a contaminação das águas (superficiais e subterrâneas). Nesse contexto, há muitos estudos que indicam possíveis consequências adversas que são geradas pela presença de fármacos nas águas, em especial nas águas indicadas para consumo humano. Assim, a quantificação de fármacos mediante diferentes técnicas instrumentais tais como a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), pode permitir o adequado controle de qualidade de tais substâncias. Além disso, se associada a técnicas potentes de extração e pré-concentração, permite a detecção e quantificação destes compostos em matrizes ambientais. Diante destes aspectos, o presente trabalho teve por objetivo desenvolver e otimizar uma técnica de separação mediante o uso de CLAE com detector de arranjo de diodos para a quantificação de fármacos em matrizes aquosas. O uso de planejamento multivariado, como a matriz Doehlert, foi empregado para otimizar os parâmetros de análise cromatográfica. Os resultados de todos os planejamentos demonstraram que a variável do fluxo de fase móvel foi mais influente para a otimização de uma maior área que as demais variáveis. Em um segundo momento o método de separação foi validado com o uso de planilhas eletrônicas de validação. As figuras de mérito avaliadas foram: linearidade e faixa linear, limites de detecção e quantificação, repetibilidade, precisão intermediária e robustez. Os resultados relacionados com a validação demonstraram uma faixa linear de trabalho entre 0,75 a 20,0 mg L-1 para todos os fármacos em estudo e coeficiente de correlação acima de 0,99, além de resíduos homocedásticos, e desvio padrões relativos abaixo de 10% para a repetibilidade, precisão intermediária e robustez.

Currently, the consumption and commercialization of drugs in the world are increasingly widespread. As most of the drugs consumed are metabolized to increase hydrophilicity, they end up being disposed of in the domestic sewage, favoring the contamination of water (surface and groundwater). In this context, there are many studies that indicate possible adverse consequences that are generated by the presence of drugs in waters, especially in the waters indicated for human consumption. Thus, the quantification of drugs by different instrumental techniques such as high performance liquid chromatography (HPLC), can allow the adequate quality control of such substances. In addition, if associated with powerful extraction and preconcentration techniques, it allows the detection and quantification of these compounds in environmental matrices. In view of these aspects, the present work had the objective of developing and optimizing a separation technique by using HPLC with diode arrangement detector for the quantification of drugs in aqueous matrices. The use of multivariate planning, such as the Doehlert matrix, was employed to optimize the chromatographic analysis parameters. The results of all the schedules showed that the mobile phase flow variable was more influential for the optimization of a larger area than the other variables . In a second moment the separation method was validated with the use of validation spreadsheets. The merit figures evaluated were: linearity and linear range, limits of detection and quantification, repeatability, intermediate precision and robustness. The results related to the validation showed a linear range of 0.75 to 20.0 mg L-1 for all drugs under study and correlation coefficient above 0.99, in addition to homocedastic residues, and deviation relative standards below of 10% for repeatability, intermediate accuracy and robustness.