Avaliação da qualidade de nanocápsulas poliméricas contendo o flavonoide phloretin : desenvolvimento de método analítico e estudo do seu efeito antitumoral in vitro no melanoma

Abstract

As aplicações dermatológicas do phloretin são restringidas por sua baixa solubilidade em água. Essa biomolécula, encontrada principalmente em frutas cítricas, apresenta recentes e importantes aplicações biológicas. A nanotecnologia tem sido utilizada como estratégia para aumentar a solubilidade aparente de fármacos e biofármacos lipofílicos em meio aquoso e melhorar seu efeito biológico. Sendo assim, este trabalho visou desenvolver, caracterizar, avaliar a segurança e os efeitos citotóxicos de nanocápsulas poliméricas contendo phloretin (NC-Phl). Além disso, incorporar NC-Phl em uma formulação semissólida inovadora a partir do polímero Lecigel® (HG-NC-Phl). O método analítico foi validado por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC –UV). Todos os parâmetros avaliados foram considerados adequados segundo a Resolução da Diretoria Colegiada (RDC) 166 de 24 de julho de 2017. A linearidade, com intervalo de 0,5 a 15 μg/mL, apresentou um R² = 0,999. O desvio padrão relativo da precisão intra e inter dia foi de 1,67; 2,39, respectivamente. A exatidão apresentou um desvio padrão relativo menor que 4,7% e o fármaco apresentou adequada porcentagem de recuperação (95,8% - 103,7%). NC-Phl foi preparada pelo método de nanoprecipitação e a avaliação da qualidade foi realizada através da medida de tamanho, pH, potencial zeta, teor do fármaco e eficiência de encapsulação. Os efeitos citotóxicos foram avaliados em células MRC5 (linhagem celular de fibroblastos) HaCaT (linhagem celular de queratinócitos) e SK-Mel-28 (linhagem celular tumoral). Foi observado que NC-Phl podem ser consideradas seguras em linhagens de fibroblastos e queratinócitos e, ao mesmo tempo, apresentou efeito citotóxico em linhagem celular SK-Mel-28 após exposição por 72h. HG-NC-Phl foram caracterizados em relação a suas propriedades físico-química, pH e teor do fármaco. HG-NC-Phl apresentou comportamento pseudoplástico. Verificou-se através da microscopia eletrônica de varredura (MEV) a presença de NC-Phl incorporadas no Lecigel®. Portanto, foi desenvolvido e validado um método analítico adequado para quantificação de NC-Phl. Foram produzidas suspensões de nanocápsulas contendo phloretin em baixa concentração, as quais foram seguras e com efeito citotóxico em cultura de células SK-MEL-28. Além disso, o hidrogel inovador proposto apresentou interessantes características para futuras aplicações dermatológicas versáteis tanto para cosmecêutica, como efeitos antioxidantes, quanto para terapia de melanoma.

Dermatological applications of phloretin are restricted by its low water solubility. This biomolecule, found mainly in citrus fruits, has recent and important biological applications. Nanotechnology has been used as a strategy to increase the apparent solubility of lipophilic drugs and biopharmaceuticals in aqueous media and improve their biological effect. Therefore, this work aimed to develop, characterize, evaluate the safety and cytotoxic effects of polymeric nanocapsules loaded phloretin (NC-Phl). Also, to incorporate NC-Phl in an innovative semi-solid formulation from Lecigel® polymer (HG-NC-Phl). The analytical method was validated by high performance liquid chromatography (HPLC –UV). All parameters evaluated were considered adequate according to the Resolution of the Collegiate Board (RDC) 166 of July 24, 2017. The linearity, with an interval of 0.5 to 15 μg / mL, presented an R² = 0.999. The relative standard deviation of intra- and inter-day precision was 1.67; 2.39, respectively. The accuracy showed a relative standard deviation of less than 4.7% and the drug showed an adequate percentage of recovery (95.8% - 103.7%). NC-Phl was prepared by the nanoprecipitation method and the quality assessment was carried out by measuring size, pH, zeta potential, drug content and encapsulation efficiency. The cytotoxic effects were evaluated in MRC5 cells (fibroblast cell line) HaCaT (keratinocyte cell line) and SK-Mel-28 (tumor cell line). It was observed that NC-Phl can be considered safe in fibroblast and keratinocyte strains and, at the same time, it presented a cytotoxic effect in SK-Mel-28 cell line after 72h exposure. HG-NC-Phl were characterized in relation to their physicochemical properties, pH and drug content. HG-NC-Phl showed pseudoplastic behavior. The presence of NC-Phl incorporated in Lecigel® was verified through scanning electron microscopy (SEM). Therefore, an adequate analytical method for the quantification of NC-Phl was developed and validated. Suspensions of nanocapsules loaded phloretin in low concentration were produced, which were safe and with a cytotoxic effect in SK-MEL-28 cell culture. Also, the proposed innovative hydrogel presented interesting characteristics for future versatile dermatological applications, both for cosmeceuticals, as antioxidant effects, and for melanoma therapy.