Determinação de CMY-2 em isolados de Escherichia coli provenientes de frango de corte

Abstract

A resistência antimicrobiana é um dos maiores problemas de saúde da atualidade pois afeta e restringe as opções terapêuticas para diversas infecções. As enterobactérias são microrganismos gram-negativos ubiquitários, sendo a E. coli a principal bactéria colonizadora do trato gastrintestinal de humanos e de animais. Essa família de microrganismos frequentemente possui cefalosporinases, seja no cromossomo ou em elementos genéticos móveis. Como exemplo podemos citar as AmpC β-lactamases, que são cefalosporinases que conferem resistência contra penicilinas, primeira, segunda e terceira gerações de cefalosporinas, e que são resistentes à inibição por ácido clavulânico, sulbactam e tazobactam. CMY-2 é a AmpC β-lactamase mais comum em animais, mas sua prevalência mundial ainda é baixa em comparação com os genes de β-lactamases de espectro estendido (ESBLs). Assim, o objetivo do trabalho foi determinar a presença de blaCMY-2 em isolados de E. coli provenientes de frango de corte, visto que os animais podem servir como reservatório deste e de outros genes de resistência. Foram analisados 33 isolados através do teste de disco difusão, para determinar o perfil de susceptibilidade contra ceftazidima, cefotaxima, meropenem, imipenem, ciprofloxacino, cefepime, doxicilina, amoxicilina/ácido clavulânico, ampicilina/sulbactam, piperacilina/tazobactam, amicacina, gentamicina, sulfametoxazol/trimetoprima e ampicilina; e de microdiluição em caldo, para a determinação da concentração inibitória mínima (CIM) para ceftazidima e cefotaxima. A técnica de PCR foi utilizada para detectar o gene blaCMY-2. Dos 33 isolados analisados, 25 (75,76%) foram positivos para blaCMY-2. Todos os isolados exibiram perfil multirresistente, além de todos terem apresentado resistência a ceftazidima e cefotaxima. Tanto o CIM50 quanto o CIM90 de ceftazidima foram de 64 μg/mL, enquanto que para cefotaxima o CIM50 foi de 16 μg/mL e o CIM90 foi de 32 μg/mL. Oito isolados foram negativos para blaCMY-2 mas apresentaram perfil de resistência contra as cefalosporinas de terceira geração, indicando que podem possuir outro mecanismo associado. A detecção do gene nos isolados provenientes dos frangos de corte sugere que esses animais podem estar servindo como reservatório genético dessa AmpC β-lactamase. O número de isolados positivos para blaCMY-2 encontrados em nosso trabalho foi superior ao encontrado em outros estudos realizados no Brasil e no mundo, mostrando que a disseminação do gene vem aumentando gradativamente.

Antimicrobial resistance is one of the biggest health concerns currently, because it affects and restricts therapeutic options for several infections. Enterobacteriaceae are ubiquitous gram-negative microorganisms, with E. coli being the main colonizing bacteria in humans and animals gastrointestinal tract. This family of microorganisms often carries cephalosporinase genes, either on chromosome or on mobile genetic elements. As an example we can cite AmpC β-lactamase, which are cephalosporinases that confer resistance against penicillins, first, second and third generation of cephalosporins, and which are resistant to inhibition by clavulanic acid, sulbactam and tazobactam. CMY-2 is the most common AmpC β-lactamases in animals, but its worldwide prevalence is still low comparing with extended spectrum β-lactamases (ESBL) genes. The purpose of this research was to determine the presence of blaCMY-2 in E. coli isolates from broiler chicken, since these animals may serve as reservoirs for this and for others resistance genes. Thirty-three isolates were analyzed by disc-diffusion method, to determine the susceptibility profile against ceftadizime, cefotaxime, meropenem, imipenem, ciprofloxacin, cefepime, doxicillin, amoxicillin/clavulanic acid, ampicillin/sulbactam, piperacillin/tazobactam, amikacin, gentamycin, sulfamethoxazole/trimethoprim and ampicillin; and by microdilution broth, to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) against ceftazidime and cefotaxime. The PCR technique was used to detect blaCMY-2. From 33 isolates analyzed, 25 (75, 76%) were blaCMY-2 positive. All isolates showed multidrug-resistant profiles, and they all were resistant to ceftazidime and cefotaxime. For ceftazidime, both MIC50 and MIC90 were 64 μg/mL, whereas for cefotaxime MIC50 was 16 μg/mL and MIC90 was 32 μg/mL. Eight isolates blaCMY-2 negative showed a resistant profile to third generation cephalosporins, indicating that they may express different resistant mechanisms. Finding this gene in broiler chicken isolates suggests that these animals may serve as genetic reservoir of this AmpC β-lactamase. The number of blaCMY-2 producer isolates found in our work was higher than those found in other researches performed in Brazil and worldwide, showing that the spread of this gene has been increasing gradually.