Fracionamento e caracterização química da fração insolúvel em água de Uncaria tomentosa (Wild.) DC e avaliação da potencial atividade antifúngica e de dano celular sobre espécies patogênicas de Candida spp.

Abstract

Uncaria tomentosa (unha-de-gato) é uma videira de ampla distribuição nas florestas tropicais das Américas. Sua casca tem sido tradicionalmente usada pelos povos indígenas para distúrbios gástricos. Além disso, imunoestimulante, antiviral, antitumoral e atividade antimicrobiana foram relatados e frequentemente atribuídas aos alcalóides, polifenóis, e glicosídeos ácidos quinóvicos que ocorrem nele. Este estudo tem como objetivo o fracionamento e posterior caracterização da casca aquosas fracções insolúveis por meio de técnicas de FTIR e LC-DAD. As frações codificados FUT1, FUT2, FUT3, FUT4 e FUT-PVPP foram então testadas quanto à atividade antifúngica contra espécies patogênicas de Candida spp. pelo método de microdiluição em caldo. A concentração inibitória mínima (MIC) foi determinada de acordo com a M27-A3 2008 diretrizes CLSI, e dano celular pelo ensaio de MTT. Os perfis LC-DAD foram diferentes para as frações estudadas. A análise de FTIR mostrou grande interação entre PVPP e polifenóis. Os valores de MIC foram bastante semelhantes em relação às fracções FUT1, FUT2 e FUT-PVPP (31,25 ug / ml). No entanto, foi inferior para FUT3 (62,50 ug / ml), e ainda não significativa para a FUT4 (250 ug / ml). Notável, a FUT1 foi a única de induzir dano celular significante (44,52%), e, portanto, os resultados do ensaio de MIC divergiram frontalmente daqueles adquiridos após os MTT. Algumas evidências suportam a hipótese de viés contra a precisão do teste MTT, principalmente devido à absorção a 570-690 nm, que também é inerente aos compostos polifenólicos que ocorrem em frações de Unha de gato.

Uncaria tomentosa (cat's claw) is a vine widely disseminated in the American rainforests. Its stem bark has been traditionally used by indigenous peoples for gastric disorders. Also, immunostimulant, antiviral, antitumor, and antimicrobial activities were reported and frequently ascribed to the alkaloids, polyphenolics, and quinovic acid glycosides occurring in it. This study aims the fractioning and further characterization of the bark aqueous insoluble fractions by FTIR and LC-DAD techniques. The coded fractions FUT1, FUT2, FUT3, FUT4 and FUT-PVPP were then assayed regarding the antifungal activity against pathogenic species of Candida spp. by microdilution broth method. The Minimum Inhibitory Concentration (MIC) was assayed according to M27-A3 2008 CLSI guidelines, and cell damage by the MTT assay. The LC-DAD profiles were different for the studied fractions. The FTIR analysis showed great interaction between PVPP and polyphenols. MIC values were quite similar regarding the fractions FUT1, FUT2, and FUT-PVPP (31.25 ug / ml). Yet, it was lower for FUT3 (62.50 ug / ml), and even nonsignificant as in FUT4 (250 ug / ml). Noteworthy, only FUT1 fraction was able to induce significant cell damage (44.52%), and, therefore, the results from MICT assay diverged frontally from those gained after the MTT ones. Some evidence supports the hypothesis of bias against the MTT test accuracy, mostly due to the absorption at 570 to 690 nm, which is also inherent to polyphenolic compounds occurring in the cat's claw fractions.