Avaliação de soluções irrigadoras para o protocolo de revascularização : estudo em cultura celular

Abstract

O protocolo de revascularização pulpar é uma atual opção de tratamento para casos de dentes portadores de necrose pulpar com rizogênese incompleta. Embora a literatura mostre resultados promissores, ainda há inúmeras variações quanto ao protocolo de desinfecção química com o uso de soluções irrigadoras. Para o êxito do tratamento, o irrigante deve ter ação antimicrobiana e, ao mesmo tempo, permitir a sobrevivência das células responsáveis pelo processo de revascularização. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do Hipoclorito de Sódio (NaOCL) associado ao EDTA, Hipoclorito de Sódio associado ao Smear Clear e do QMix® 2 in 1 em diferentes concentrações e tempos experimentais, como possíveis irrigantes para o protocolo de revascularização, por meio de ensaios in vitro em cultura de células primárias obtidas da papila apical humana e em linhagem celular endotelial. Os aspectos avaliados foram citotoxicidade, índice de polaridade celular, migração e efeito angiogênico, por meio do ensaio de tubulogênese. Os dados foram submetidos ao teste estatístico ANOVA seguido de post-hoc de Bonferroni com nível de significância de 5%. Para todos os grupos, um maior período de contato com o irrigante foi relacionado a uma menor viabilidade celular. O efeito citotóxico também foi dose dependente para todos os irrigantes, após o período de 24h (p<0.5). O grupo NaOCL/EDTA apresentou as maiores taxas de viabilidade (p<0.5). O índice de polaridade celular foi afetado pela concentração dos irrigantes. Menores tempos de exposição resultaram em morfologias celulares mais alongadas, especialmente no grupo NaOCL/EDTA. A velocidade de migração celular foi menor do que o controle, em todos os grupos analisadas nas diferentes concentrações e períodos (p<0.5), exceto na concentração de 0.1% no grupo NaOCL/EDTA após 1h de exposição. No período de 24h, o grupo NaOCL/EDTA 0.1% apresentou a maior velocidade de migração (p<0.5). A direcionalidade de migração foi reduzida nos maiores períodos de exposição aos irrigantes, em todos os grupos e concentrações, o que foi menos evidente para o NaOCL/EDTA. No ensaio de tubulogênese, células endoteliais tratadas com NaOCL/EDTA demonstraram uma maior distância de migração em uma matriz tridimensional (3D), comparado aos outros grupos, independentemente da concentração e período experimental avaliados (p<0.5).Em conclusão, dentre as soluções testadas, o uso de NaOCL associado ao EDTA apresentou melhores resultados em relação à resposta biológica do modelo de cultura celular avaliado

Pulp revascularization protocol is a current treatment option for cases of immature teeth presenting pulp necrosis. Although promising results has been demonstrated, there are still numerous variations regarding the chemical disinfection protocol. Irrigant solutions must have antimicrobial activity and also allow maintainance of cells viability. The aim of this study was to evaluate the effect of Sodium Hypochlorite (NaOCL) associated with EDTA, Sodium Hypochlorite associated with Smear Clear and QMix® 2 in 1 at different concentrations and experimental periods, as possible irrigants for the revascularization protocol. Cytotoxicity, cellular polarity index and migration assays were performed in primary cell culture obtained from human apical papilla. Cytotoxicity and angiogenic effect by a tubulogenesis assay were assessed using an endothelial cell line. Data were submitted to statistical test ANOVA followed by Bonferroni post hoc test with a significance level of 5%. For all groups, a longer contact period with the irrigant was related to lower cell viability. The cytotoxic effect was also dose dependent for all irrigants after the 24h period (p<0.5). The NaOCL/EDTA group had the highest viability rates (p<0.5). Cell polarity index was affected by irrigant concentration. Shorter exposure times resulted in longer cell morphologies, especially in the NaOCL/EDTA group. Cell migration rate was lower than control in all groups analyzed at different concentrations and periods (p<0.5), except at 0.1% concentration in NaOCL/EDTA group after 1h of exposure. In the 24h period, the 0.1% NaOCL/EDTA group presented the highest migration speed. (p<0.5). Migration directionality was reduced in the longest irrigant exposure periods in all groups and concentrations. NaOCL/EDTA presented the highest migration directionality compared to the other groups in both concentrations and periods evaluated. In the sprouting assay, endothelial cells treated with NaOCL/EDTA demonstrated a greater migration distance in a threedimensional (3D) matrix compared to the other groups, regardless of the concentration and experimental period evaluated (p<0.5). In conclusion, amongst the tested solutions, the use of NaOCL associated with EDTA presented better results regarding to the biological behavior of the evaluated cell culture model