Quantificação de Campylobacter fetus subsp. fetus e Campylobacter fetus subsp. venerealis em vacinas reprodutivas bovinas

Abstract

Bactérias da espécie Campylobacter fetus são responsáveis por causar perdas reprodutivas em bovinos e ovinos. As infecções por C. fetus em bovinos podem ser causadas por duas das três subespécies: C. fetus subsp. fetus (Cff) e C. fetus subsp. venerealis (Cfv). A vacinação é a principal forma de controle das doenças causadas por Cff e Cfv, entretanto, no Brasil, não há instruções normativas que controlem a produção e eficácia das doses vacinais. Em vista disso, o objetivo deste trabalho foi avaliar as vacinas reprodutivas bovinas comercializadas no Brasil quanto a quantificação de DNA genômico de Cff e Cfv. Para isso, as seis vacinas comercializadas no ano de 2022 no Brasil contendo antígenos para Cfv e Cff foram incluídas no estudo. O DNA genômico total de cada vacina foi extraído e empregado em reações de PCR quantitativa (qPCR) utilizando primers e sondas específicos para Cff e para Cfv. O número de cópias estimado em cada dose vacinal foi calculado a partir das regressões lineares obtidas através das curvas padrão geradas. As análises estatísticas foram realizadas utilizando o software GraphPad Prism 8. O número de cópias genômicas variou significativamente entre as vacinas testadas, de acordo com o teste de Kruskal-Wallis (p<0,05). Especificamente, o número de cópias de Cfv variou de 2 a 7x105, enquanto, para Cff, o número de cópias variou de 2x102 a 4x106. Os resultados observados demonstraram que não há semelhança do número de cópias de Cfv e Cff entre as vacinas atualmente comercializadas no Brasil (p<0,05). Ainda, todas apresentaram diferença no número de cópias de Cfv e Cff na mesma vacina (p<0,05). Com isso, estudos de eficácia, que definam a quantidade mínima de antígeno por dose, são necessários com o intuito de garantir além da eficácia das vacinas, as dosagens corretas, e, assim, reduzir o número de casos perdas reprodutivas por C. fetus nos rebanhos bovinos.

Bacteria of the species Campylobacter fetus are responsible for causing reproductive losses in cattle and sheep. C. fetus infections in cattle can be caused by two of the three subspecies: C. fetus subsp. fetus (Cff) and C. fetus subsp. venerealis (Cfv). Vaccination is considered the main method of controlling diseases caused by Cff and Cfv, however, in Brazil, there are no normative instructions that control the production and effectiveness of vaccine doses. In view of this, the objective of this work was to evaluate the bovine reproductive vaccines commercially available in Brazil regarding the quantification of genomic DNA of Cff and Cfv. For this, the six vaccines marketed in 2022 in Brazil containing Cfv and Cff antigens were included in the study. The total genomic DNA of each vaccine was extracted and used in quantitative PCR reactions (qPCR) using specific primers and probes for Cff and Cfv. The estimated number of copies in each vaccine dose was calculated from the linear regressions obtained through the generated standard curves. Statistical analyzes were performed using the GraphPad Prism 8 software. The number of genomic copies varied significantly among the tested vaccines, according to the Kruskal-Wallis test (p<0.05). Specifically, the copy number for Cfv ranged from 2 to 7x105, while for Cff, the copy number ranged from 2x102 to 4x106. The observed results demonstrated that there is no similarity in the number of copies of Cfv and Cff among the commercially available vaccines in Brazil (p<0.05). In addition, they all showed a difference in the number of copies of Cfv and Cff in the same vaccine (p<0.05). Thus, efficacy studies, which define the minimum amount of antigen per dose, are necessary to guarantee in addition to the effectiveness of the vaccines, the correct dosages, and thus reduce the number of cases of productive losses due to C. fetus in cattle herds.