Avaliação in vitro da toxicidade de um regulador de crescimento a base de flumetralina

Abstract

O consumo de agrotóxicos tem um crescimento acentuado devido a agricultura ter uma base consolidada na economia brasileira. A fumicultura está entre as principais atividades agrícolas desenvolvidas, sendo o Brasil líder na exportação. Isso se deve ao fato de que o tabaco brasileiro possui alta qualidade e um alto nível tecnológico empregado na cultura. O sistema imunológico pode ser afetado diretamente pela exposição aos agrotóxicos e, deste modo, doenças auto-imunes, neurodegenerativas, doenças alérgicas e até mesmo câncer podem ser desenvolvidas. Este trabalho visou avaliar, através de um modelo in vitro, os efeitos tóxicos do uso da flumetralina, um regulador de crescimento vegetal amplamente utilizado no cultivo do fumo. As células de macrófagos de camundongos RAW 264.7 e fibroblastos 3T3 foram cultivadas em meio DMEM e incubadas a 37°C em 5% de CO2. A citotoxicidade da flumetralina foi avaliada através dos ensaios de redução do MTT e captação do vermelho neutro nas duas linhagens após 24 horas de incubação. Com base nas curvas concentração-resposta foram obtidos os EC20, EC40 e EC60 para cada linhagem. Sendo eles para RAW 264.7, respectivamente, 1,181, 1,552 e 1,945 mg/L e, para as células 3T3, respectivamente, 0.963, 1,037 e 1,103 mg/L. Adicionalmente, flumetralina foi avaliada quanto à produção de radicais livres e potencial de membrana mitocondrial. Para a linhagem RAW 264.7 posteriormente foram realizados os testes de óxido nítrico e o perfil de citocinas, avaliando fator de necrose tumoral (TNF) e interleucina-10 (IL-10). Foi observado aumento na produção de espécies reativas em ambas as linhagens celulares. Nas células RAW 264.7, a flumetralina induziu uma hiperpolarização mitocondrial, enquanto foi observada uma despolarização nas células 3T3. No perfil de citocinas, a flumetralina diminui a expressão de IL-10 e aumentou a expressão de TNF em todas as concentrações testadas. Com este trabalho, foi possível observar a toxicidade da flumetralina em ambas as linhagens testadas e os efeitos causados sobre o sistema imune, afetando a resposta anti-inflamatória dos macrófagos.

The use of pesticides has grown sharply due to agriculture having a consolidated base in the Brazilian economy. Tobacco farming is among the main agricultural activities developed, with Brazil being the leader in exportations. This is due to the fact that Brazilian tobacco has high quality and a high level of technology used in the crop. The immune system can be directly affected by exposure to pesticides and, therefore, autoimmune, neurodegenerative diseases, allergic diseases and even cancer can be developed. This work aimed to evaluate, through an in vitro model, the toxic effects of the use of flumetralin, a plant growth regulator widely used in tobacco cultivation. Mice macrophage cells RAW 264.7 and 3T3 fibroblasts were cultured in DMEM medium and incubated at 37°C in 5% CO2. The cytotoxicity of flumetralin was evaluated using MTT reduction and neutral red uptake assays in both strains after 24 hours incubations. Based on the cytotoxicity of flumetralin, EC20, EC40 and EC60 were obtained for each strain. For RAW 264.7 they were, respectively, 1.181, 1.552 and 1.945 mg/L and for the 3T3 lineage, respectively, 0.963, 1.037 and 1.103 mg/L. Additionally, the production of free radicals and mitochondrial membrane potential, were evaluated for both cell types. For the RAW 264.7 cells, nitric oxide and the cytokine profile, evaluating tumor necrosis factor (TNF) and interleukin-10 (IL-10) were also analyzed. There was an increase in free radicals production for both cell lines. In RAW 264.7 cells, flumetralin induced a mitochondrial hyperpolarization, however in 3T3 lineage, a depolarization was observed. In the cytokine profile, flumetralin decreased the expression of IL-10 and increased the expression of TNF at all concentrations tested. With this work, it was possible to observe the toxicity of flumetralin in both cell types tested and the effects caused on the immune system, affecting the anti-inflammatory response of macrophages.