Caracterização espermática e criopreservação seminal de Pogonias courbina

Abstract

A miraguaia, Pogonias courbina, já foi considerada um importante recurso pesqueiro, porém, devido principalmente à sobrepesca, estáclassificada como ameaçada de extinção pelo ICMBio e vulnerável pela IUCN Red List. Visando a conservação dessa espécie na natureza e o desenvolvimento de sua produção em cativeiro, é necessário realizar sua caracterização reprodutiva, que vai auxiliar na sua reprodução e conservação. Com essa caracterização, será possível desenvolver e aplicar biotécnicas reprodutivas, como acriopreservação espermática, queauxiliará no estabelecimento de um banco de germoplasma da espéciee no seu manejo reprodutivo. Nesse sentido, este trabalho buscoucaracterizar a morfologia, morfometria e cinética espermática de machos de miraguaia, e a partir daí, através de uma sequência de experimentos, desenvolver o primeiro protocolo de criopreservação espermática para a espécie. Ao longo de cinco experimentos, foi determinada a combinação de temperatura e tempo de descongelamento (26ºC por 14 s), tempo de equilíbrio (10 minutos) antes do congelamento, avaliados os extensores HBSS, glicose 3% e glicose 5%, avaliados os crioprotetores permeáveis dimetil-sulfóxido, propilenoglicol, dimetilformamida, etilenoglicol e crioprotetores não permeáveis glicose, frutose, sacarose, trealose, leite em pó desnatado e gema de ovo. Foi utilizada a técnica CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) para selecionar os melhores tratamentos ao longo do experimento e ao final, os três melhores resultados de motilidade espermática foram selecionados para realizar a fecundação de duas desovas coletadas. Foi utilizado sêmen de animais com origem de cativeiro e coletados na natureza, e os resultados apresentaram o mesmo padrão. As soluções crioprotetoras contendo HBSS obtiveram os melhores resultados de motilidade quando utilizadas em combinação com DMSO 10% + gema de ovo 5% (MOT –71.8%), PG 10% + gema de ovo 5% (MOT –50.9%) e PG 10% + leite em pó 5% (MOT –45.6%). As fêmeas obtiveram os melhores resultados de taxa de fecundação com a solução contendo DMSO 10%+ gema de ovo 5%, sendo determinada essa composição como a mais adequada para criopreservação espermática em P. courbina. Este trabalho contribuirá para a conservação da diversidade genética da espécie, facilitará seu manejo produtivo em cativeiro. Além disso, apresenta as primeiras informações sobre indução à desova e fecundação artificial para a espécie.

The southern black drum, Pogonias courbina, was once considered an important fishing resource.Nowadays, mainly due to overfishing, it is classified as threatened with extinction by ICMBio and vulnerable by the IUCN Red List. Toconserve this species in nature and develop its production in captivity, it is necessary to understandits reproductive characteristics, which will help inits reproduction and conservation. Throughthis characterization, it will be possible to develop and apply reproductive biotechniques, such as sperm cryopreservation, which will assist in the establishment of a germplasm bank for the species and its reproductive management. This work was realized to characterize the sperm morphology, morphometry and kinetics of southern black drummales and, through a sequence of experiments, develop the first sperm cryopreservation protocol for the species. Afterfive experiments, the combination of temperature and thawing time (26ºC for 14 s), equilibrium time (10 minutes) before freezing was determined. The extendersHBSS, 3% glucose and 5% glucose were evaluated,andwere tested thepermeable cryoprotectants dimethyl sulfoxide, propylene glycol, dimethylformamide, ethylene glycol and non-permeable cryoprotectants glucose, fructose, sucrose, trehalose, skimmed milk powder and egg yolk. The CASA (Computer Assisted Sperm Analysis) technique was used to select the best treatments throughout the experimentsand at the end, the three best sperm motility results were selected to carry out the fertilization of two females. Miltfrom captive and wild animals wascollected and used, and the results showed the same patternin both group of animals. Cryoprotectant solutions containing HBSS obtained the best motility results when used in combination with DMSO 10% + egg yolk 5% (MOT –71.8%), PG 10% + egg yolk 5% (MOT –50.9%) and PG 10 % + powdered milk 5% (MOT –45.6%). The best results for fertilization with frozen sperm were obtained with the solution containingHBSS extender,10% DMSO + 5% egg yolk, being this composition determined the most suitable for sperm cryopreservation in P. courbina. This work will contribute to the conservation of the species' genetic diversity and will facilitate its productive management in captivity. Furthermore, it presents the first information on spawning induction and artificial fertilization for the species.