Influência da baixa temperatura de armazenamento sobre o peso, a melanização, a atividade e a formação de casulo de larvas de Galleria mellonella

Abstract

A larva da Galleria mellonella, conhecida também como larva da grande traça da cera, é um inseto da ordem Lepidoptera que tem sido amplamente pesquisado nos últimos anos como um modelo experimental biológico, alternativo a modelos vertebrados. Dentre os estudos realizados têm-se o seu uso para avaliação de virulência fúngica, de infecções bacterianas, investigação de patógenos orais humanos, entre outros. Isso se deve ao fato de seu sistema imune inato ser semelhante ao dos animais usados tradicionalmente em pesquisa, além de sua criação ser menos custosa e laboriosa que a de outros modelos animais, e estar de acordo com o princípio dos 3Rs. Sua criação passa pelas fases de ovo, larva, pupa e mariposa e tem duração média de 6 a 8 semanas, a temperaturas entre 29 e 39°C e alta umidade. Apesar disso, ainda há falta de padronização de protocolos de criação. O presente estudo teve, portanto, como objetivo determinar o período de armazenamento a baixas temperaturas e seus efeitos sobre o peso médio larval diário e semanal de larvas de G. mellonella, além da análise dos efeitos, sobre os parâmetros semanais de melanização, atividade e formação de casulo. Para o presente estudo foram selecionadas 360 larvas de G. mellonella, sendo 40 utilizadas como controle e as demais divididas em dois grupos de 160 larvas, com pesos variando entre 231 e 322 mg, faixa considerada ideal para sua utilização como modelo biológico na inoculação de patógenos. O grupo controle foi mantido pelo período de 14 dias em temperatura ideal de criação de 30±1ºC, enquanto os grupos de avaliação diária e semanal foram mantidos na temperatura de 14±1ºC. Observou-se que houve uma diminuição no peso médio larval a cada 24 horas no grupo avaliado diariamente, porém sem diferença estatística significativa (p>0,05). Já no grupo de avaliação semanal houve diferença estatística (p<0,05) no peso médio larval entre os dias 1, 7 e 14. Quanto à avaliação dos demais parâmetros, somente a formação de casulo teve diferença estatística (p<0,05) entre os dias 1,7 e 14, já que todas as larvas mantiveram-se com melanização mínima e atividade máxima durante todo o período avaliado. Esses resultados sugerem que as baixas temperaturas, por mais que 24 horas, podem interferir negativamente no peso das larvas sem, entretanto, alterar a avaliação dos parâmetros de melanização, atividade e formação de casulo.

The Galleria mellonella larvae, also known as the great wax moth, is na insect of the Lepidoptera order which has been widely researched in the last years as a biological experimental model as na alternative to vertebrate models. There are published studies about its use for evaluating fungal virulence, bacterial infections, investigation of human oral pathogens, among others. This is due to the fact that their innate immune system is similar to animals traditionally used in research, in addition to the fact that their creation is cheaper and less laborious in comparison to traditional animal models. Its creation goes through the phases of egg, larvae, pupa and moth and lasts commonly 6 to 8 weeks, at temperatures between 29 and 39°C and high humidity. Despite this, there is still a lack of standardization of breeding protocols. The present study therefore aimed to determinate the period of storage at low temperatures and its effects onG. Mellonella larvae daily and weekly weight, besides the weight,the effects on the weekly parameters of melanization, activity and cocoon formation were analyzed. For the present study, 360 G. mellonella larvae were selected,which 40 of them were used as controls and the others were divided into two groups of 160 larvae, with weights varying between 231 and 322 mg, a range that is considered to be ideal for its use as a biological model in the inoculation of pathogens. The control group was maintained at an ideal breeding temperature of 30±1ºC for 14 days, while the daily and weekly evaluation groups were maintained at a temperature of 14±1ºC. It was observed that there was a decrease in the average larval weight every 24 hours in the daily evaluation group, but without a statistical significant difference (p>0.05).In the weekly evaluation group, there was a statistical difference (p<0.05) in the average larval weight between days 1, 7 and 14. In the others parameters evaluation, only cocoon formation had a statistical difference (p<0.05) between days 1.7 and 14, as all larvae remained with mínimal melanization and maximum activity throughout the evaluated period. These results suggest that low temperatures, for more than 24 hours, have a negative effect over the weight of the larvae however do not affect the evaluation of the melanization, activity and cocoon formation parameters.