Implantação de técnicas para avaliação da dinâmica mitocondrial por microscopia confocal no Centro de Microscopia Eletrônica da UFRGS
dc.contributor.advisor | Guma, Fátima Theresinha Costa Rodrigues | pt_BR |
dc.contributor.author | Biehl, Henrique Beck | pt_BR |
dc.date.accessioned | 2012-08-24T01:39:46Z | pt_BR |
dc.date.issued | 2012 | pt_BR |
dc.identifier.uri | http://hdl.handle.net/10183/54442 | pt_BR |
dc.description.abstract | O microscópio confocal apresenta grande vantagem para o estudo de tecidos e células que requerem imagens em grande detalhamento com o controle dos diversos parâmetros de aquisição de imagem. As mitocôndrias são organelas celulares dinâmicas que possuem um ciclo complexo que envolve os processos de fissão, fusão e biogênese mitocondrial. O Resveratrol (RSV) é uma fitoalexina que tem sido utilizada para fins terapêuticos devido às evidências que mostram um possível efeito antioxidante nas células. A ativação das células estreladas hepáticas (Hepatic Stellate Cells - HSC) está relacionada com o aumento da proliferação e da produção de matriz extracelular que resulta no desenvolvimento da fibrose hepática. Em nossos trabalhos anteriores, 50μM de RSV induziu estresse oxidativo e morte celular em 24 horas de tratamento, efeito que foi atenuado em 120 horas. No presente trabalho, foram realizados tratamentos com concentrações crescentes de RSV (1, 10 e 50μM) em culturas de células da linhagem GRX, modelo de HSC. Através de diferentes técnicas de análise de imagens de microscopia confocal e utilizando diferentes marcadores fluorescentes, estudou-se a formação de espécies reativas de oxigênio, a relação entre massa mitocondrial versus sua atividade, alterações na morfologia dessa organela, sua distribuição celular e sua fagocitose (mitofagia). Pela quantificação da fluorescência do marcador DCF®, evidenciou-se que doses crescentes de RSV induz um aumento de espécies reativas de oxigênio. Utilizando as sondas fluorescentes Mito Tracker® Green e Mito Tracker® Orange, que marcam, respectivamente, massa e potencial de membrana mitocondrial, foi possível atestar que a massa mitocondrial permanece constante, mas que a atividade dessa organela diminui com o aumento da dose de RSV. Da mesma forma, foi possível observar que o tratamento com RSV induziu alteração de morfologia e redistribuição das mitocôndrias ao longo do citoplasma da GRX, comparado ao grupo controle que apresenta mitocôndrias perinucleares. Pela análise de co-localização entre os marcadores Mito Tracker® Green e LysoTracker® Red, marcador de lisossomas, evidenciou-se que o RSV induziu mitofagia. As análises de imagens obtidas por microscopia confocal se mostraram úteis na avaliação do comportamento e resposta das mitocôndrias em relação às diferentes concentrações de RSV. Esses resultados estão de acordo com os obtidos por meio de técnicas quantitativas, como citometria de fluxo e ensaios espectrofluorimétricos, e mostram que a microscopia confocal, associada às ferramentas de análise de imagens, também pode ser importante na obtenção de dados quantitativos. | pt_BR |
dc.format.mimetype | application/pdf | |
dc.language.iso | por | pt_BR |
dc.rights | Open Access | en |
dc.subject | Microscopia eletrônica | pt_BR |
dc.title | Implantação de técnicas para avaliação da dinâmica mitocondrial por microscopia confocal no Centro de Microscopia Eletrônica da UFRGS | pt_BR |
dc.type | Trabalho de conclusão de graduação | pt_BR |
dc.identifier.nrb | 000855882 | pt_BR |
dc.degree.grantor | Universidade Federal do Rio Grande do Sul | pt_BR |
dc.degree.department | Instituto de Biociências | pt_BR |
dc.degree.local | Porto Alegre, BR-RS | pt_BR |
dc.degree.date | 2012 | pt_BR |
dc.degree.graduation | Ciências Biológicas: Bacharelado | pt_BR |
dc.degree.level | graduação | pt_BR |
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TCC Ciências Biológicas (1289)