Aperfeiçoamento e validação de método por cromatografia líquida de alta eficiência para determinação de minociclina na análise da matéria-prima

Abstract

A Minociclina é um antibiótico semi-sintético de segunda geração de administração oral. Usado no tratamento de infecções genitourinárias, infecções na pele e tecidos moles, pneumonia atípica, entre outros. As farmacopeias americana (USP) e britânica (BP) preconizam o doseamento da matéria-prima minociclina por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) empregando solventes como tetrahidrofurano (THF), dimetilformamida (DMF) e oxalato de amônio. O objetivo deste trabalho foi propor alterações cromatográficas nos métodos propostos visando substituir modificador orgânico e otimizar o tempo de retenção do fármaco, de modo que o método possua especificidade para emprego em estudos de estabilidade do fármaco. Para isso diversas condições foram testadas e a condição a qual utilizou-se coluna Bridge C8 (250x4,6 mm, 5,0 μm), à temperatura de 40 °C, com fase móvel composta de tampão fosfato de potássio pH 7,0, acetonitrila e trietilamina (TEA) (75:25:0,5; v/v), a uma vazão de 1,0 mL/min foi a que se mostrou mais simples e reprodutível. As amostras foram preparadas na concentração de 200 μg/mL em fase móvel. O método desenvolvido foi validado e apresentou ser preciso (DPR= 1,79); específico frente às condições de estresse a que a amostra foi submetida; linear na faixa de concentração de 25,0 a 500,0 μg/mL, com coeficiente de correlação igual a 0,9999; exato e robusto, indicando ser adequado para o controle de qualidade da matéria prima de minociclina.

Minocycline is a second-generation semisynthetic antibiotic of oral administration. It is used in the treatment of genitourinary infections, skin and soft tissue atypical pneumonia and others. The American (USP) and British (BP) pharmacopoeia recommend the determination of minocycline raw material by high performance liquid chromatography (HPLC) using solvents such as tetrahydrofuran (THF) , dimethylformamide (DMF) and ammonium oxalate . The aim of this study was propose changes in the chromatographic method intended to replace the organic modifier and optimize the drug retention time, so that the method has specificity for use in stability studies. For that different conditions were tested and the one that uses Bridge C8 (250x4, 6 mm , 5.0 mM) column at 40 ° C with a mobile phase consisting of potassium phosphate buffer pH 7.0 acetonitrile and triethylamine (TEA) (75:25:0,5 , v/v) at a flow rate of 1.0 ml/min, proved to be the simpler and more reproducible condition. The samples were prepared in a concentration of 200 μg/ml in mobile phase. The method was validated and showed to be precise (RSD = 1.79) ; specific due to the conditions of stress which the sample was subjected ; linear in the concentration range from 25.0 to 500.0 mg/mL , with a coefficient of correlation coefficient of 0.9999, exact and robust , indicating that it is suitable for quality control of minocycline raw material.