Similaridades genotípicas e análise da patogenicidade de prevotella ssp. isoladas do biofilme supragengival de pacientes com fibrose cística

Abstract

O objetivo do estudo foi o de investigar a expressão de fatores de virulência (betalactamase, cápsula e hemólise), determinar a suscetibilidade antimicrobiana e as características genotípicas de espécies de Prevotella retiradas da placa supragengival de pacientes com fibrose cística (FC). Para isso, o biofilme supragengival de sete adultos portadores de FC estável foi coletado e imediatamente levado a uma câmara de anaerobiose. As bactérias do gênero Prevotella foram selecionadas para o estudo baseado na sequência 16S rRNA, totalizando uma amostra de 16 diferentes espécies bacterianas de Prevotella. A produção da enzima beta-lactamase foi analisada por meio de uma solução de nitrocefina. A presença de cápsula foi analisada utilizando um microscópio e a capacidade de hemólise verificada utilizando-se ágar sangue. A suscetibilidade antimicrobiana da amostra foi testada para 12 diferentes antibióticos, utilizando-se Etest®. A análise genotípica inter e intra espécie foi realizada através da técnica de Eletroforese em Campo Pulsante. Como resultados, mais de 50% das espécies de Prevotella produziram a enzima beta-lactamase e hemólise e aproximadamente 40% apresentaram cápsula. A amostra testada apresentou resistência antimicrobiana para os antibióticos clindamicina, metronidazol, tetraciclina e tobramicina. Ainda, foram observadas características genotípicas similares em uma análise intra espécie da amostra de Prevotella analisada. Assim, conclui-se que espécies de Prevotella da placa dentária de pacientes com fibrose cística foram capazes de expressarem fatores de virulência, bem como apresentaram resistência antimicrobiana. Ainda, observou-se características genotípicas similares entre a amostra.

The aims of the study were to investigate the production of virulence factors (betalactamase, haemolysis and capsule), to determine the antibiotic susceptibility and the genotypic characteristics of Prevotella species from dental plaque of cystic fibrosis (CF) patients. For this, supragingival biofilm of seven CF stable patients was collected and immediately placed into the anaerobic cabinet. A PCR reaction was carried out to amplify the 16S rRNA gene and Prevotella species were selected to the study, with a total of 16 different species of Prevotella. Nitrocefin solution was used to identify if Prevotella isolates were capable to produce β-lactamases. The presence of capsules was observed using a microscope and the haemolysis activity analysed using Supplemented Brucella Blood Agar (SBBA). E-tests® were used to test the antimicrobial susceptibility to 12 different antibiotics. Genotypic characteristics intra and inter-species were analysed using Pulsed Field Gel Electrophoresis (PFGE) method. As a result, more than 50% of Prevotella species from dental plaque of CF patients were capable to produce beta-lactamases and haemolysis and approximately 40% of them presented capsules. Furthermore, the isolates were resistant to the antibiotics clindamycin, metronidazole, tetracycline, and tobramycin. The study found closely related genotypic characteristics among Prevotella species, using PFGE method. In conclusion, Prevotella species from dental plaque of CF patients were capable to produce virulence factors and also presented antibiotic resistance. Additionally, some isolates were genetically similar.