Comparação entre vias de administração de células-tronco em camundongos neonatos

Abstract

Células-tronco são amplamente estudadas para a busca de novas formas de terapias para diversas doenças devido a sua capacidade de auto renovação e de se diferenciar em vários outros tipos celulares. As células tronco melhor caracterizadas são as células-tronco hematopoiéticas (CTH) e células-tronco mesenquimais (CTM), ambas sendo encontradas principalmente na medula óssea. No entanto, não existem estudos em que se observe como é a biodistribuição dessas células em camundongos neonatos nem por qual via de administração esses transplantes seriam mais eficazes, sendo que esses dados seriam importantes visando a busca por novas formas terapêuticas, principalmente de doenças em que a progressão é rápida e uma intervenção precoce seja relevante. O objetivo do presente trabalho foi avaliar a biodistribuição das CTH e CTM injetadas em camundongos neonatos de dois dias de vida, avaliando órgãos como fígado, pulmão, baço, coração, rim, córtex cerebral e medula óssea. As células foram injetadas por três vias de administração distintas (seio venoso retro orbital, veia temporal e via intraperitoneal) e os animais foram avaliados em diferentes tempos (48 horas e 30 dias pós-transplante). Para isso, foram utilizados camundongos C57BL6-GFP como doadores de células e camundongos 129SV como receptores, pois dessa forma se torna viável a detecção das células transplantadas. As células provenientes da medula óssea dos doadores foram purificadas e contadas em câmera de Neubauer para realização dos transplantes. Os órgãos dos animais transplantados foram analisados por imunohistoquímica utilizando anticorpo anti-GFP. As CTM não foram encontradas em quantidades significativas em nenhum dos tecidos analisados. O principal resultado encontrado foi a determinação da via da veia temporal (VT) como a mais eficiente. CTH estavam presentes após 48 horas no fígado e no baço e, em 30 dias, na medula óssea e no baço, em animais que havam sido imunossuprimidos pré-transplante. Embora tenha sido observada diferença estatística somente na medula óssea e no baço em 30 dias e pela via VT, os demais órgãos também apresentaram células GFP+ e, mesmo que em pouca quantidade, talvez seja o suficiente para auxiliar no tratamento de determinas condições.

Stem cells are widely studied aiming new forms of therapies for various diseases due to their ability to self renew and differentiate into several other cell types. The most characterized stem cells are hematopoietic stem cells (HSCs) and mesenchymal stem cells (MSCs), both of which are mainly found in the bone marrow. However, there are not studies analysing the biodistribution of these cells in newborn mice, nor testing different routes of administration in which the transplants would be more effective, and such data are important for developing new therapeutic approaches, mainly for diseases with rapid progression and where early intervention is relevant. The aim of this study was to evaluate the biodistribution of HSCs and MSCs in two-days-old newborn mice in organs such as liver, lung, spleen, heart, kidney, cerebral cortex and bone marrow. Cells were injected by three different administration routes (venous retro-orbital sinus, temporal vein and intraperitoneal route) and engraftment was evaluated at different times (48 hours and 30 days post-injection). C57BL6-GFP mice were used as cell donors and 129SV as recipients, in order to detect the transplanted cells. Cells from donor’s bone marrow purified and counted in a Neubauer camera to perform the transplants. The organs from transplanted animals were analyzed by immunohistochemistry using anti-GFP antibody. We did not find MSC at any organs analysed. The temporal vein (TV) was the most efficient route and the bisdistribution of HSC in 48 hours was more concentrated in the liver and spleen; and in 30 days in the bone marrow and spleen, in animals that suffered immunosuppression before transplant. Although there was statistical difference only in the bone marrow and spleen in 30 days and via the TV route, other organs also presented few GFP+ cells which may be sufficient to assist in the treatment of certain conditions.