Relação da deleção do gene NKG2C e haplótipos de HLA-E com a susceptibilidade ao lúpus eritematoso sistêmico

Abstract

O lúpus eritematoso sistêmico (LES) é uma doença autoimune, caracterizada pela ativação excessiva da resposta imune inata que induz produção exacerbada de autoanticorpos e deposição de imunocomplexos. O processo inflamatório observado no LES é promovido por células como linfócitos T e linfócitos Natural Killer os quais expressam em sua superfície receptores pertencentes à família NKG2. O subtipo NKG2C desempenha função de ativação, induzindo a liberação de citocinas e citotoxicidade, quando ligado a moléculas HLA-E expressas por essas células. Sendo assim, infere-se que os receptores NKG2C e as moléculas HLA-E possuam um importante papel na susceptibilidade ao LES, já que são capazes de contribuir para o desenvolvimento do processo inflamatório. O objetivo desse estudo é avaliar se há relação entre a deleção do gene NKG2C e haplótipos de HLA-E com a susceptibilidade ao LES em uma população do sul do Brasil. A metodologia desse trabalho envolve a realização de PCR convencional e genotipagem. O PCR de NKG2C utiliza três pares de primers, o primeiro par amplifica a região do breakpoint da deleção, o segundo par amplifica o éxon 6 do gene NKG2C e o terceiro par atua como controle interno de amplificação e amplifica a região entre os éxons 3 e 4 do gene NKG2A. A genotipagem dos haplótipos de HLA-E baseia-se em múltiplas reações de PCR, as quais utilizam oito pares de primers para amplificação dos alelos *0101, *0103 (*01031 e *01032) e *0104, sendo sete pares para a identificação alélica e um como controle interno (gene human growth hormone). A genotipagem da deleção de NKG2C foi realizada em 326 indivíduos portadores de LES e 214 indivíduos controles saudáveis. A frequência dos genótipos encontrada no grupo de casos foi 0,72 wt/wt e 0,28 wt/del e no grupo controle foi 0,67 wt/wt e 0,33 wt/del. Não foram encontrados genótipos del/del em qualquer dos grupos, e as frequências dos genótipos da população estudada não estavam em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Serão realizadas análises adicionais para confirmação dos genótipos de NKG2C. A genotipagem dos haplótipos de HLA-E está em andamento.

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized by excessive activation of innate immune responses that induces the production of autoantibodies directed against nuclear and cytoplasmatic antigens and leads to immunocomplexes deposition. The inflammatory process is mainly mediated by T and Natural Killer cells, which express NKG2C receptors on their surface. NKG2C receptors are involved with cytokine production and cytotoxicity when bound to HLA-E molecules expressed by other cells. Thus, it was hypothesized that NKG2C and HLA-E receptors can have an important role in SLE development, since these molecules can contribute to the development of an inflammatory process. The aim of this study is to evaluate the relationship between NKG2C gene deletion and HLA-E haplotypes with SLE susceptibility in a South Brazilian population. The methodology used was conventional PCR followed by genotyping. The NKG2C PCR reaction uses three sets of primers, the first amplifies the deletion breakpoint, the second amplifies the exon 6 of NKG2C gene and the third pair acts as an internal control and amplifies the region between exons 3 and 4 of NKG2A gene. HLA-E haplotype genotyping uses eight sets of primers, seven of them specific for the identification of alleles *0101, *0103 (*01031 and *01032) and *0104. The eighth pair amplifies the human growth hormone gene as an internal control. The genotyping was performed in 326 SLE patients and 214 control individuals. The genotypic frequencies observed were 0.72 wt/wt and 0.28 wt/del for the SLE individuals and 0.67 wt/wt and 0.33 wt/del for the control individuals. No del/del genotypes were found and the frequencies were not in Hardy-Weinberg equilibrium. Additional analyses will be performed to confirm the NKG2C genotypes. HLA-E genotyping is still in progress.