Desenvolvimento de metodologia analítica para detecção de diuréticos em alimentos à base de proteína do soro de leite (whey-protein)

Abstract

Alimentos à base de proteína de soro de leite (whey-protein) são amplamente utilizados por atletas da categoria profissional do esporte, no entanto, há relatos na literatura de produtos desse tipo contendo substâncias consideradas doping. A presença dos diuréticos clorotiazida, hidroclorotiazida e furosemida em quaisquer quantidades na amostra de urina caracteriza doping e implica em penalidade, independente de intencionalidade ou não de uso. Foi proposto um método de detecção desses três compostos através de cromatografia líquida de alta eficiência acoplada a detector de arranjo de diodos (CLAE-DAD), utilizando coluna C8 (250 mm x 4,60 mm x 5μm) e método gradiente, com fluxo de 0,8 ml/min, composto pela fase móvel (FM) tampão acetato de amônio 10 mM ph3 (A) e Acetonitrila (B) na proporção inicial de 10 % de FM B de 0-13 min, aumento até 60% em 24 min e retorno à composição original até 25 minutos. O método apresentou especificidade, linearidade (r> 0,9980), exatidão (CV < 5,0 %), porém precisão insatisfatória (CV > 5,0 %). Treze produtos foram testados e foi detectado a presença de diuréticos em 7 amostras. Assim, o método pode ser aplicado na rotina de forma qualitativa, assegurando a ausência dessas substâncias no whey-protein antes do consumo.

Isolated milk whey-proteins are widely used by professional sport category’s athletes, however, there are reports in the literature of such products containing doping substances. The presence of diuretics chlorothiazide, hydrochlorothiazide and furosemide in any quantities in the urine sample characterizes doping and implies a penalty, regardless of intentional or non- intentionality use. A method of detection of these three compounds was proposed by high efficiency liquid chromatography coupled to a diode arrangement detector (HPLC-DAD), using a C8 column (250 mm x 4.60 mm x 5μm) and gradient elution, with flow of 0.8 ml/min, composed of the mobile phase (FM) ammonium acetate buffer 10 mM ph3 (A) and Acetonitrile (B) in the initial ratio of 10 % of FM B 0-13 min, increase up to 60 % in 24 min, return to the original composition for up to 25 minutes. The method presented specificity, linearity (r> 0.9980), accuracy (CV < 5.0 %), but unsatisfactory precision (CV> 5.0 %). Thirteen products were tested and the presence of diuretics in 7 samples was detected. The method can be applied in the routine for qualitative analysis ensuring the absence of these substances in whey-protein before consumption.