Análise do polimorfismo 2848 G/A do gene TLR9 em indivíduos HIV+, HCV+ e coinfectados

Abstract

As infecções por HIV e HCV configuram graves problemas de saúde pública no Brasil. Variantes genéticas do hospedeiro já foram associadas a diferenças na suscetibilidade a ambas as infecções e progressão à AIDS, assim como à coinfecção por estes vírus. Os TLRs (do inglês, Toll-Like Receptors) são importantes componentes da resposta imune inata e agem reconhecendo PAMPs e DAMPs. O TLR9, codificado pelo gene sinônimo localizado no cromossomo 3, está presente na porção interior de endossomos, e reconhece moléculas de DNA não metilado. Esse receptor pode participar da resposta à infecção pelo HIV reconhecendo o DNA formado a partir da atividade da enzima transcriptase reversa sobre o RNA viral. Além disso, a interação da proteína viral gp120 com células dendríticas inibe respostas inatas mediadas a partir do TLR9, sugerindo um papel desse receptor na resposta contra o HIV. Uma variante do gene TLR9, o polimorfismo de nucleotídeo único 2848 G/A (rs352140), é alvo de estudos de associação com a infecção por HIV, e seu papel ainda não foi claramente elucidado na infecção pelo HCV. Da mesma forma, há uma controvérsia a respeito deste SNP na coinfecção por HIV/HCV. Dito isso, o presente trabalho tem como objetivo avaliar as frequências da variante 2848 G/A (TLR9) em indivíduos HCV+, HIV+ e coinfectados, provenientes da região Sul do Brasil, estratificando-os em diferentes grupos étnicos. Foram genotipados um total de 1182 indivíduos, divididos nos grupos: controle (n = 409); HCV+ (n = 376); HIV+ (n = 296); HCV+/HIV+ (n = 101). As sequências de interesse foram amplificadas por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) convencional, utilizando um par de iniciadores específico para a região analisada. Os amplicons gerados por PCR foram submetidos à digestão enzimática com endonuclease (Bsh1236I). A verificação dos genótipos foi realizada em gel de agarose 3% com brometo de etídeo sob luz UV. Foram calculadas as frequências genotípicas e alélicas do polimorfismo. Os grupos estudados foram comparados para verificar a existência de influência da variante na susceptibilidade à infecção pelo HIV, pelo HCV e coinfecção por HIV/HCV. Foi utilizado o teste de qui-quadrado de Pearson para comparação dos dados, e valores de p menores que 0,05 foram definidos como estatisticamente significativos. O estudo foi aprovado pelos comitês de ética da Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), Hospital de Clínicas de Porto Alegre e Universidade Luterana do Brasil (ULBRA). Todos os participantes da pesquisa assinaram um termo de consentimento desenvolvido de acordo com a Resolução No. 466 do Ministério da Saúde. A partir dos resultados do trabalho, observamos que não há uma diferença estatisticamente significativa entre os grupos (p>0,05 em todas as comparações). Dessa forma, o estudo sugere que a variante 2848 G/A não influencia as infecções por HCV e HIV e a coinfecção por ambos os vírus na população do Sul do Brasil.

HIV and HCV infections constitute important public health problems in Brazil. Host genetic variants have already been associated with differences in susceptibility to both infections and progression to AIDS, as well as coinfection by both viruses. TLRs (Toll-like Receptors) are important components of the innate immune response and act recognizing PAMPs and DAMPs. TLR9, formed from the synonymous gene located on chromosome 3, is present in the inner portion of endosomes, and recognizes molecules of unmethylated DNA. This receptor may participate in the response to HIV infection by recognizing the DNA formed from the activity of the reverse transcriptase enzyme on viral RNA. In addition, the interaction of the gp120 viral protein with dendritic cells inhibits innate responses mediated by TLR9, suggesting a role for that receptor in the response to HIV. A variant of the TLR9 gene, the 2848 G/A single nucleotide polymorphism (rs352140), is targeted in association studies with HIV infection, and its role has not yet been clearly elucidated in HCV infection. Likewise, there is controversy regarding this SNP in HIV/HCV coinfection. The aim of this study was to evaluate the frequencies of the 2848 G/A variant (TLR9) in HCV+, HIV+ and coinfected individuals from the southern region of Brazil, stratifying them in different ethnic groups. A total of 1182 individuals were genotyped, divided into groups: control (n = 409); HCV+ (n = 376); HIV+ (n = 296); HCV+/ HIV+ (n = 101). The sequences of interest were amplified by conventional Polymerase Chain Reaction (PCR) using a pair of specific primers for the analyzed variant. With the amplicons generated by PCR, the samples were cleaved using specific restriction enzyme (Bsh1236I). Genotype verification was performed on 3% agarose gel with ethidium bromide under UV light. The genotypic and allelic frequencies of the polymorphism were calculated. The groups studied were compared to verify the influence of the variant on susceptibility to HIV infection, HCV and HCV/HIV coinfection. Pearson's chi-square test was used for comparison of the data, and p-values lower than 0.05 were defined as statistically significant. The study was approved by the ethics committees of the Universidade Federal do Rio Grande do Sul (UFRGS), Hospital de Clínicas de Porto Alegre and Universidade Luterana do Brasil (ULBRA). All study participants signed a consent form developed according to Resolution No. 466 of Ministério da Saúde. From the results of the study, we observed that there is no statistically significant difference between the groups (p> 0.05 in all cases). Thus, the study suggests that the 2848 G/A variant does not influence HCV and HIV infections and coinfection by both viruses in the southern Brazilian population.