Padronização de técnica molecular para detecção simultânea das mutações nos genes da nucleofosmina (NPM1) e do Fms-like tirosina quinase-3 (FLT3/ITD) em pacientes com leucemia mieloide aguda através da técnica de PCR multiplex e eletroforese capilar

Abstract

Leucemia mieloide aguda (LMA) é um câncer maligno de caráter heterogêneo. Sua classificação, atualmente, baseia-se quanto às alterações citogenéticas, moleculares e imunofenotipagem, porém a sua estratificação é, principalmente, pelas alterações citogenéticas. Entretanto, cerca de 45% dos pacientes com LMA possuem cariótipo normal, o que dificulta a correta estratificação do tratamento. Novos fatores de prognósticos, como alterações moleculares já descritas na literatura, são necessários na rotina do laboratório de diagnóstico para, desta forma, ocorrer a correta categorização através de grupos de riscos. O presente trabalho de conclusão da residência visa a implementação no Serviço de Diagnóstico Laboratorial do Hospital de Clínicas de Porto Alegre a detecção das mutações nos genes NPM1 e FLT3/ITD através das técnicas reação em cadeia da polimerase (PCR) multiplex e eletroforese capilar. Para isto, foi realizada a padronização da técnica assim como a sua validação através dos seguintes testes: precisão do teste, verificado quanto a sua repetibilidade e reprodutibilidade; veracidade que foi avaliada pelo índice de concordância; especificidade in silico onde as sequências de primers foram analisadas em relação à sequência alvo através da ferramenta BLAST. Ao implementar este exame na rotina, uma assistência mais abrangente será composta, contribuindo no manejo do paciente com LMA na correta estratificação do seu prognóstico.