Influência do estrogênio nas disfunções temporomandibulares em ratas ovariectomizadas

Abstract

Introdução: Mulheres sofrem mais com dores crônicas do que homens, sendo a percepção, tolerância e limiares diferentes entre os sexos. As causas desse dimorfismo sexual podem estar relacionadas às variações hormonais do estrogênio, que ainda tem um papel controverso na modulação da dor. Objetivo: Avaliar a relação entre o modelo de dor inflamatória orofacial com os níveis de estrogênio resultante da ovariectomia e os efeitos da reposição de estrogênio em ratas ovariectomizadas. Material e Métodos: 80 ratas Wistar adultas foram inicialmente divididas em 2 grupos: (1) Sham Ovariectomia; (2) Ovariectomia (OVX). Sete dias após a cirurgia para retirada dos ovários, as ratas foram submetidas a uma infiltração unilateral de Adjuvante Completo de Freund (CFA) ou salina na Articulação Temporomandibular (ATM) direita, sendo divididas em ratas sham ovariectomizadas ou ovariectomizadas com infiltrações de salina ou CFA na ATM. O tratamento consistiu na reposição hormonal (21 dias) de 17β-estradiol (28 μg/kg/dia) por via oral ou placebo. A alodinia mecânica na região da ATM foi avaliada pelo teste de von Frey (VF) eletrônico nos tempos basal, 14º, 17º, 21º e 30º dia após a OVX. Os animais foram avaliados quanto a hiperalgesia térmica pelo teste da Placa Quente (HP) no 30º dia após a OVX, e quanto ao comportamento do tipo-depressivo pelo teste do Nado Forçado (FST) no 31º dia após a OVX. Após a eutanásia, análises neuroquímicas do marcador pró-inflamatório (TNF-ɑ) e do fator de crescimento (BDNF) foram realizadas pelo teste de ELISA em amostras do tronco encefálico e hipocampo. Além disso, os níveis de estrogênio foram avaliados por ensaio imuno quimioluminescente em amostras de soro. Os dados foram analisados utilizando o modelo de Equação de Estimativa Generalizada (GEE) com correção de Bonferroni para avaliar simultaneamente os parâmetros ao longo do tempo, e pelo teste de Kruskal-Wallis com post hoc de Dunn e testes de Qui-quadrado, considerando P<0,05 como significativo. Este projeto foi aprovado pela CEUA - HCPA (nº 2021-0632). Resultados: Animais que receberam infiltrações intra-articulares de CFA apresentaram maior resposta nociceptiva no teste de VF nos dias 14, 17 e 21 (p<0.05). Não houve diferença significativa entre os grupos na latência do teste HP (p=0,735), nem na latência para imobilidade e tempo total de nado do teste FST (p=0.800; p=0.998, respectivamente). Não houve diferença significativa entre os grupos nos níveis de BDNF no hipocampo (p=0,232) e no tronco encefálico (p=0,054), nem nos níveis de TNF-ɑ no hipocampo (p=0,081). No entanto os níveis de TNF-ɑ no tronco encefálico apresentaram diferença significativa entre os grupos (p=0,043;). Conclusão: O modelo animal utilizado foi efetivo em induzir dor orofacial, sendo uma opção pré-clínica na busca de novas intervenções terapêuticas. A reposição hormonal foi efetiva no restabelecimento de níveis séricos de estrogênio, porém, contrariando a hipótese inicial, nas condições experimentais utilizadas, a falta do estrogênio não alterou o limiar nociceptivo de ratas ovariectomizadas.

Introduction: Women suffer more from chronic pain than men, with perception, tolerance and thresholds being different between genders. The causes of this sexual dimorphism may be related to hormonal variations in estrogen, which still has a controversial role in modulating pain. Objective: To evaluate the relationship between the orofacial inflammatory pain model and estrogen levels resulting from ovariectomy, and the effects of estrogen replacement in ovariectomized rats. Material and Methods: 80 adult female Wistar rats were initially divided into 2 groups: (1) Sham Ovariectomy; (2) Ovariectomy (OVX). Seven days after surgery to remove the ovaries, the rats were subjected to a unilateral infiltration of Complete Freund's Adjuvant (CFA) or saline in the right Temporomandibular Joint (TMJ), being divided into sham ovariectomized rats or ovariectomized rats with saline or CFA infiltrations into the TMJ. Treatment consisted of oral hormonal replacement (21 days) of 17β-estradiol (28 μg/kg/day) or placebo. Mechanical hyperalgesia in the TMJ region was assessed using the electronic von Frey test (VF) at baseline, 14th, 17th, 21st and 30th day after OVX. The animals were evaluated for thermal hyperalgesia using the Hot Plate (HP) test on the 30th day after OVX, and for depressive-like behavior using the Forced Swim Test (FST) on the 31st day following OVX. After euthanasia, neurochemical analysis of the pro-inflammatory marker (TNF-ɑ) and growth factor (BDNF) were performed using the ELISA test in brainstem and hippocampus samples. Furthermore, estrogen levels were assessed by immunochemiluminescent assay in serum samples. The data were analyzed using the Generalized Estimating Equation (GEE) model with Bonferroni correction to simultaneously assess the parameters over time, and the Kruskal-Wallis with Dunn post hoc test and Chi-square tests, considering P<0.05 as significant. This project was approved by CEUA - HCPA (#2021-0632). Results: Animals that received intra-articular CFA infiltrations showed higher nociceptive response in the VF test on days 14, 17 and 21 (p<0.05). There was no significant difference between the groups in the latency of the HP test (p=0.735), nor in the latency for immobility and total swimming time of the FST test (p=0.800; p=0.998, respectively). There was no significant difference between the groups in BDNF levels in the hippocampus (p=0.232) and brainstem (p=0.054) and in TNF-ɑ levels in the hippocampus (p=0.081). However, the levels of TNF-ɑ in the brainstem showed a significant difference between groups (p=0.043). Conclusion: The animal model employed in this study was effective in inducing orofacial pain, being a preclinical option in the search for new therapeutic interventions. Hormone replacement was effective in restoring serum estrogen levels, however, in contrast to the initial hypothesis, under these experimental conditions, the lack of estrogen did not change the nociceptive threshold in ovariectomized rats.