Uma cisteíno endopeptidase de larvas de Boophilus microplus com atividade na digestão de vitelina

Abstract

O carrapato Boophilus microplus (Canestrini, 1887) (Acari:Ixodidae) é um ectoparasita hematófago cujo ciclo de vida apresenta uma fase de vida livre, que compreende o desenvolvimento dos ovos, eclosão, e desenvolvimento das larvas, até o encontro com o hospedeiro. Como muitos artrópodes ovíparos, para completar seu desenvolvimento embrionário, este parasita depende de substâncias de reserva do vitelo presentes no ovo, principalmente vitelina (Vt), que continua presente no estágio larval. Neste trabalho, está descrita a purificação e caracterização de uma atividade proteolítica presente em larvas de B. microplus. O protocolo de purificação, baseado em técnicas cromatográficas, resultou numa preparação homogênea da enzima, com massa molecular estimada em 45 kDa. A atividade e completamente inibida por inibidores específicos que indicam que esta enzima pertence à classe das cisteíno endopeptidases. A enzima apresentou atividade ótima a temperatura de 42°C e pH 5,5 e é instável em pH acima de 7,5. A atividade sobre substratos peptídicos fluorogênicos foi testada, e atividade proteolítica sobre vitelina também foi verificada. Experimentos com extratos de larvas comprovaram a presença de vitelina neste estágio do desenvolvimento. Também foi observado um aumento da atividade proteolítica, acompanhado de uma diminuição no conteúdo de proteína total e de vitelina nos extratos, conforme as larvas se desenvolvem. Estes resultados, somados a presença de atividade proteolítica em extratos de intestinos dissecados de larvas de B. microplus, podem sugerir um possível papel desta enzima na digestão de vitelina em larvas não alimentadas, suprindo suas necessidades nutricionais no período que antecede a alimentação hematófaga.